Toxoplasma gondii: II.Caracterizaçäo antigênica de taquizoíto de oito amostras / Toxoplasma gondii: II.Tachyzoite antigenic characterization of eigth strains

O amostras de T. gondii - LIV IV, LIV V e S 11 isoladas de suínos, RH e VPS de seres humanos, AS 28 de camundongos, HV III de cäo e CN de gato - foram analisadas com o objetivo de verificar a existência de possíveis diferenças na resposta imune quando inoculadas em coelhos. Através da técnica de ELISA, näo foram constatadas diferenças entre as oito amostras estudadas. Todas as amostras reagiram de forma semelhante com soros homólogos e heterólogos. A suspensäo antigênica, constituída de extrato celular total, mostrou-se eficiente no ELISA teste indireto, já que os soros positivos reagiram fortemente e os soros negativos näo apresentaram reaçäo contra os antígenos testados. A análise das amostras, pela técnica de Western blot, revelou que os isolados de T. gondii compartilham vários antígenos com algumas variaçöes. Dentre as bandas reconhecidas no Western blot, três foram comuns a todas as amostras: a p33 (33-37 kDa), p54 (52-55 kDa) e a p66 (66 kDa). A amostra HV III, isolada recentemente de um cäo, foi a que mais diferiu no perfil antigênico. Essa amostra näo apresentou três antígenos (50, 70 e 75 kDa) presentes nas demais amostras. Apenas dosi antígenos, um de 62 kDa da CN e outro de 67 kDa da LIV IV, foram amostra-específicos

Avaliação de métodos alternativos para o diagnóstico laboratorial confirmatório da Doença de Chagas / Evaluation of alternative methods for the confirmatory diagnosis of Chagas disease

Tendo em vista a ocorrência de resultados falso-positivos, falso-negativos, contraditórios e duvidosos em todos os métodos rotineiramente usados para o diagnóstico laboratorial da doença de Chagas (DC), o objetivo deste trabalho foi avaliar métodos alternativos que pudessem contribuir para o diagnóstico laboratorial confirmatório da DC. Entre eles, a detecção de antígenos circulantes do Trypanosoma Cruzi (T. cruzi) através de imunodifusão radial dupla (IDRD), contra-imunoeletroforese (CIE), eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e Western Blot (WB); a detecção de antígenos urinários de T. cruzi por SDS-PAGE, WB e enzimaimunoensaio (ELISA) de “sanduíche” de duplo anticorpo, e a detecção de anticorpos específicos contra frações antigênicas do T. cruzi pelo método do WB. Para tanto, utilizam-se 4 grupos de amostras de soros obtidos de 203 pacientes com DC (crônica), de 23 pacientes com resultados sorológicos prévios inconclusivos para DC, de 53 pacientes com outras doenças e de 50 indivíduos sadios. Também se utilizam 4 grupos de amostrasde urina obtidas de 50 pacientes com DC (35 crônica e 15 congênita), de 20 pacientes com DC crônica, de 11pacientes com outras doenças e de 13 indivíduos sadios. Os resultados obtidos revelaram positividade de 4,70 por cento a 25,00 por cento na IDRD e de 50,00 por cento na CIE. As técnicas de SDS-PAGE e WB não permitiram detectar a presença de antígenos circulantes de T. cruzi. Com as amostras de urina, a SDS-PAGE apresentou frações protéicas com peso molecular aparente de 20 a 84KDa; no teste de WB, a maioria dessas frações foram reconhecidas tanto pelo sorohiperimune de coelho anti-T.cruzi como pelo soro pré-imune de coelho, caracterizando inespecificidade de reconhecimento.. Através doELISA detectaram-se antígenos urinários de T.cruzi em 50,00 por cento das amostras de pacientes com DC (formas crônicas e congênita), em 45,00 por cento das amostras de pacientes com outras doenças e em nenhuma amostra de indivíduos sadios, resultando em índices de 50,00 por cento de sensibilidade e 79,20 por cento de especificidade. Das 136 amostras de soros de pacientes com DC, 118 (86,80 por cento) tiveram o resultado sorológico prévio confirmado pelo teste de WB, 16 (11,76 por cento) padrão indeterminado e 2 (1,47 por cento) padrão negativo; das 23 amostras com resultados sorológicos prévios inconclusivos, nenhum apresentou WB positivo, sendo 14 (60,86 por cento) com resultados indeterminado e 9 (39,13 por cento), negativo. Das 53 amostras de soros de pacientes com outras doenças, 28 (52,83 por cento) apresentaram resultado indeterminado e 25 (47,16 por cento), negativo no WB e das 50 amostras de soros de indivíduos sadios, apenas 8 (16,00 por cento) mostraram reatividade com padrão indeterminado e 42 (84,00 por cento) padrão negativo no WB. Esses valores corresponderam a índices de 86,80 por cento de sensibilidade e 100 por cento de especificidade. Os resultados obtidos permitem sugerir que os resultados sorológicos prévios para o diagnóstico da DC podem ser confirmados por diferentes métodos, principalmente pelo ELISA, para a detecção de antíngenos urinários de T. cruzi, e pelo teste de WB, para a detecção de anticorpos específicos contra frações antigênicas do T. cruzi que poderiam contribuir para limitar as conseqüências médicas, legais e sociais de um resultado sorológico prévio inconclusivo para o diagnóstico da DC. Esses resultados reforçam a necessidade de estudos adicionais e de contínuo esforço para o desenvolvimento de teste padrão ideal para o diagnóstico laboratorial confirmatório da DC.

Soropositividade para Doença de Chagas em pacientes com infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) no Hospital Universitário Regional do Norte do Paraná (HURNP), Londrina, Paraná / Soropositivity to Chagas disease in patients with human immunodeficient virus infection attended at Hospital Universitário Regional do Norte do Paraná (HURNP), Londrina, Brazil

A reativação das formas indeterminadas e crônicas da Doença de Chagas (DC) tem sido associada com leucemias, linfomas, transplantes e infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), segundo Rocha et al; Pitella; Uip et ai. Devido à disseminação da síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA) na América Latina, onde o DC continua sendo uma importante endemia, há um presente e crescente risco de co-infecção com o HIV e o Trypanossoma Cruzi, afirmam Amato e Neto et al. O objetivo deste trabalho é determinar a freqüência desta associação nos pacientes atendidos no HURNP, Londrina Paraná. Os resultados das reações sorológicas para DC (HAI, IFI, E ELISA) realizados em 181 soros randomicamente selecionados de pacientes com testes anti-HIV reagentes (Elisa e Western Blot) foram analisados. Entre eles, 4 (2,20%) mostraram resultados positivos em, pelo menos, duas reações sorológicas para DC; 4 (2,20%) somente na HAI; 2 (1,10% somente na IFI e 1 (0,55%) mostrou resultados duvidosos na HAI; 2 (1,10%) somente na IFI e 1 (0,55%) mostrou resultados duvidosos na HAI E IFI. O fato de que a migração tem levado a DC a novas regiões geográficas e de que a DC tem sido crescentemente diagnosticada em populações urbanas, onde há uma alta prevalência de infecção pelo HIV, segundo Rocha et al, reforça a importância de se considerar o T.cruzi outro importante patógeno oportunista associado com a SIDA, especialmente em regiões endêmicas para o T.cruzi.

Anticorpo anti-Trypanosoma cruzi como fator de reatividade cruzada na pesquisa de anticorpos anti-DNA por imunofluorescência indireta / Anti-Trypanosoma cruzi antibodies as a factor of cross-reactivity in the research of anti-DNA antibodies by indirect immunofluorescence

Na pesquisa de anticorpos anti-DNA podem ser utilizadas várias metodologias como a imunofluorescência indireta (IFI), enzimaimunoensaio (ELISA) ou radioimunoensaio (RIE) com DNA marcado com 14C, sendo que a IFI empregando Crithçidia luciliae como substrato é a mais utilizada. Sendo este um parasita flagelado da família dos tripanosomatídeos, apresenta estruturas antigênicas comuns ao Trypanosoma cruzi. Portanto, soros de pacientes com sorologia positiva para Doença de Chagas (DC) podem apresentar uma reatividade cruzada entre estes parasitas, constituindo um fator interferente na reação de IFI para pesquisa de anticorpos anti-DNA. Com o objetivo de verficar a freqüência com que esta inferência ocorre na rotina laboratorial, analisou-se os resultados obtidos na pesquisa de anti-DNA por IFI realizadas no período de junho de 1994 a julho de 1995 no Setor de Imunologia Clínica do Hospital Universitário Regional do Norte do Paraná, Londrina-Paraná. Das 927 reações realizadas, 60 (6,47%) foram reagentes, 832 (89,75%) não reagentes e 35 (3,77%) apresentaram um padrão inespecífico de fluorescência. Suspeitando-se de reatividade cruzada, foram realizadas reações sorológicas para DC (HAI e IFI) nestas amostras, sendo que 100% apresentaram resultados reagentes para ambas as reações. Estes dados confirmam a interferência dos anticorpos anti-Trypanosoma cruzi na pesquisa de anticorpos anti-DNA por IFI e alertam para a necessidade da confirmação de resultados falsos-positivos, principalmente em regiões onde a DC é endêmica.